In vitro evaluation of the cytotoxicity and eye irritation potential of preservatives widely used in cosmetics

Abstract The consumption of cosmetics has been increasing every year and is expected to reach $675 billion by 2020 at an estimated growth rate of 6.4% per year. Exposure to skin irritants is the major cause of non-immunological inflammation of the skin. Therefore, the safety evaluation of cosmetic preservatives should be increased. Thus, the present work aimed to evaluate the cytotoxicity as the viability endpoint and the eye irritation potential of preservatives used in cosmetics. Cytotoxicity assays were performed using MTT and NRU in human keratinocytes (HaCaT), human dermal fibroblasts, adult (HDFa), and human hepatoma cells (HepG2). The eye irritation potential was evaluated using the Hen's Egg Test-chorioallantoic membrane (HET-CAM). The evaluated preservatives were methylparaben (MP), propylparaben (PP), phenoxyethanol (PE), and a mixture of methylchloroisothiazolinone and methylisothiazolinone (CMI/MI). All preservatives showed cytotoxic potential within the permitted concentrations for use in cosmetic products. In the HET-CAM test, PE and CMI/MI, MP, and PP were classified as severe, moderate, and poor irritants, respectively. Our results indicate that proper safety evaluations are required to ensure the beneficial properties of preservatives on cosmetic products without exceeding exposure levels that would result in adverse health effects for consumers.

Trypanosoma cruzi: analysis of two different strains after piplartine treatment

ABSTRACT The hemoflagellate protozoan, Trypanosoma cruzi, mainly transmitted by triatomine insects through blood transfusion or from mother-to-child, causes Chagas' disease. This is a serious parasitic disease that occurs in Latin America, with considerable social and economic impact. Nifurtimox and benznidazole, drugs indicated for treating infected persons, are effective in the acute phase, but poorly effective during the chronic phase. Therefore, it is extremely urgent to find innovative chemotherapeutic agents and/or effective vaccines. Since piplartine has several biological activities, including trypanocidal activity, the present study aimed to evaluate it on two T. cruzi strains proteome. Considerable changes in the expression of some important enzymes involved in parasite protection against oxidative stress, such as tryparedoxin peroxidase (TXNPx) and methionine sulfoxide reductase (MSR) was observed in both strains. These findings suggest that blocking the expression of the two enzymes could be potential targets for therapeutic studies.

Trypanocidal activity of Piper arboreum and Piper tuberculatum (Piperaceae) / Atividade tripanocida de Piper arboreum e Piper tuberculatum (Piperaceae)

No escopo de nossas pesquisas sobre agentes bioativos da flora brasileira, vinte e quatro extratos e frações de Piper arboreum Aub. e Piper tuberculatum Jacq. (Piperaceae) tiveram sua atividade tripanocida avaliada através do ensaio colorimétrico com MTT. As atividades mais potentes foram manifestadas pelas frações hexânicas das folhas de P. arboreum (CI50 = 13,3 µg/mL) e P. tuberculatum (CI50 = 17,2 µg/mL). As frações hexânicas dos frutos de P. tuberculatum e P. arboreum também apresentaram efeito tóxico potente contra as formas epimastigotas de Trypanosoma cruzi, com valores de CI50 (µg/mL) de 32,2 e 31,3, respectivamente. Adicionalmente, o estudo fitoquímico da fração hexânica das folhas de P. arboreum forneceu duas amidas pirrolidínicas, piperilina (1) e 4,5-diidropiperilina (2), que podem ser responsáveis pela atividade antiprotozoária desta fração.

In the scope of our ongoing research on bioactive agents from Brazilian flora, twenty-four extracts and fractions obtained from Piper arboreum Aub. and Piper tuberculatum Jacq. (Piperaceae) were screened for trypanocidal activity by using MTT colorimetric assay. The strongest activity was found in hexane fractions from the leaves of P. arboreum (IC50= 13.3 µg/ mL) and P. tuberculatum (IC50 = 17.2 µg/mL). Hexane fractions of the fruits of P. tuberculatum and P. arboreum showed potent toxic effects on epimastigote forms of Trypanosoma cruzi, with values of IC50 (µg/mL) of 32.2 and 31.3, respectively. Additionally, the phytochemical study of the hexane fraction of P. arboreum leaves furnished two pyrrolidine amides, piperyline (1) and 4,5-dihydropiperyline (2), which could be responsible, at least in part for the observed antiprotozoal activity.

Adesão de protozoários à superfície de dispositivos intra-uterinos / Protozoan adhesion on intra uterine device (IUD)surface

Os dispositivos intra-uterinos (DIU) são usados por aproximadamente 100 milhões de mulheres no mundo todo. O DIU não é prescrito para mulheres com predisposição à doença pélvica inflamatória que normalmente é causada pelas doenças sexualmente transmissíveis (DSTs) não tratadas. A tricomoníase, uma das três principais infecções vaginais, é causada por um protozoário flagelado, Trichomonas vaginalis, transmitido por contato sexual, e mesmo as mulheres assintomáticas são capazes de transmiti-lo. O objetivo deste trabalho foi verificar por microscopia eletrônica de varredura a adesão deste protozoário às superfícies metálica e plástica do DIU. Fragmentos do DIU foram colocados em meio de Diamond contendo T. vaginalis e, após 3 dias de incubação a 37ºC, retirados e convenientemente tratados para observação em microscópio eletrônico de varredura. A leitura revelou os protozoários aderidos às superfícies plástica e metálica do dispositivo. Embora o DIU não esteja associado diretamente com a alta incidência de doença pélvica inflamatória, poderia tornar-se reservatório de organismos potencialmente infecciosos.

Mapeamento de bandas de Trans-splicing in vitro com extratos nucleares de Tryopanosoma cruzi / Band mapping of in vitro trans-splicing reaction using Trypanosoma cruzi nuclear extracts

A maturaçäo dos pré-mRNAs em tripanosomatídeos ocorre por meio de um mecanismo denominado trans-splicing, que envolve a excisäo dos íntrons e a uniäo dos éxonsde dois transcritos independentes. Um transcrito curto , splice leader (SL) RNA, é trans-spliceado a pré-mRNAs aceptores, originando o RNA maduro. O objetivo deste trabalho foi padronizar as condiçöes necessárias que favoreçam essa reaçäo in vitro, empregando, para este fim, extratos nucleares de formas epimastigotas de T. cruzi e pré-mRNA de alfa-tubulina de tripanosoma africano. Nas condiçöes experimentais para a reaçäo de trans-splicing, em que se utilizou extrato nuclear de cepa Bolíviae o pré-mRNA a-tubulina (aceptor) marcado radioativamente, na ausência do pré-mRNA SL exógeno, foi obtida uma banda acima do pré-mRNA de alfa-tubulina (possível produto), sugerindo que esta reagiu com o SL presente no extrato nuclear. A banda foi processada, mas näo se detectou a sequência do produto esperado(SL + éxon alfa-tubulina). Entretanto, o tamanho da banda na reaçäo de trans-splicing (acima do pré-mRNA) pode trtar-se do lariat, cuja estrutura molecular näo possibilitaria seu sequenciamento pela metodologia empregada. Interessante salientar que a banda somente aparece na reaçäo de trans-splicing contendo ATP, o que sugere tratar-se de uma reaçäo de transesterificaçäo.

Use of PCR reactions (polymerase chain reaction) on Trichomonas vaginalis diagnosis in patients from Araraquara region (State of Säo Paulo, Brazil)

Trichomonas vaginalis é um protozoário flagelado da família TRICHOMONADIDAE, responsável por uma doença que ataca o sistema genito-urinário, causando, em mulheres, vaginites e cervicites, dentre outras complicaçöes, e, em homens, prostatites, uretrites e síndrome genito-urinárias menores. Em funçäo de que diagnósticos precisos säo uma importante ferramenta para o tratamento apropriado e prevençäo da transmissäo da doença,este trabalho possibilitou a padronizaçäo da reaçäo de PCR e avaliaçäo de seu emprego no diagnóstico deste parasita. Na padronizaçäo da reaçäo, utilizou-se DNA genômico de diferentes cepas de T. vaginalis mantidas em laboratório e o protocolo da PCR foi realizado de acordo com os parâmetros propostos por Riley e colaboradores. Secreçöes vaginais foram coletadas e amplificadas pela mesma metodologia. Cento e oitenta amostras clínicas foram analisadas por 3 métodos diferentes, o PCR e os métodos tradicionais exame a fresco e cultura do parasita em meio de Diamond. Dessas amostras, 6 foram positivas pela PCR, das quais duas foram detectadas apenas por PCR, uma por PCR e cultura, duas por PCR e exame fresco e uma pelos 3 métodos usados. Esses resultados demonstraram que a reaçäo de PCR pode ser convenientemente padronizada nas condiçöes do laboratório e seu uso efetivo como método diagnóstico de tricomoníase foi confirmado.

Trichomonas vaginalis: a comparative analysis of diagnostical methods

Entre as doenças sexualmente transmitidas, de etiologias näo viral, a trichomonadíase é a mais prevalente. É causada pelo protozoário Trichomonas vaginalis e os métodos disponíveis para diagnóstico atualmente näo säo muito sensíveis para detecçäo do parasita. Neste trabalho, foi analisada a eficiência de métodos como exame a fresco, cultura em meio de Diamond e reaçäo de imunofluorescência indireta (RIFI), usando conjugados anti-IgM, -IgG e -IgA, biotinilados e näo-biotinilados. As culturas mostraram resultados ligeiramente melhores do que o exame a fresco. O uso de conjugados biotilinados na RIFI diminuíram os títulos dos soros positivos em relaçäo aos näo-biotilinados, embora näo tenha sido detectada qualquer reatividade com conjugado anti-IgA humana. ELISA foi também utilizada para detecçäo de anticorpos nos soros de pacientes que apresentaram positividade para pelo menos um dos testes. Nestas análises foram usados os mesmos conjugados biotilinados, aumentando-se as diluiçöes dos soros para 1/200, 1/400 e 1/800, mostrando que o teste de ELISA pode ser usado com vantangens sobre a RIFI; anticorpos anti-IgA puderam ser detectados por esse teste, quando foi utilizado conjugado biotilinado. Esse teste pode, entäo, ser usado concomitantemente com o de cultura e exame a fresco para auxilar no diagnóstico da tricomoníase.

Comparison of the antigenic composition of different strains of Trypanosoma cruzi

A composiçäo antigênica de três cepas de Trypanosoma cruzi, Bt (formas epimastigotas), Bolívia e Bolívia larga (formas tripomastigotas) mostrou-se diferente por Western-blot, indicando variaçäo na expressäo de determinantes antigênicos. Os soros obtidos em períodos diferentes da infecçäo apresentaram, no ensaio ELISA, resposta de IgM mais elevada do que IgG, em período precoce de infecçäo, e a resposta de IgA quase nunca ocorreu. Tais diferenças nos perfis antigênicos das cepas podem refletir o comportamento das mesmas no hospedeiro